細(xì)胞計(jì)數(shù)板(也稱血球計(jì)數(shù)板)是一種用于在顯微鏡下精確計(jì)算液體中細(xì)胞數(shù)量的專用玻片。它的核心作用是定量，幫你把“肉眼看不見”的細(xì)胞變成可測(cè)量的數(shù)據(jù)。

　　它長什么樣?

　　它是一塊比普通載玻片更厚的特制玻璃板，中間有“H”形刻痕，形成兩個(gè)長方形計(jì)數(shù)平臺(tái)。每個(gè)平臺(tái)上都蝕刻著精密的網(wǎng)格，最常見的改進(jìn)型紐鮑爾計(jì)數(shù)板的網(wǎng)格由9個(gè)大方格組成，中間那個(gè)大方格又細(xì)分為400個(gè)小方格，這是計(jì)數(shù)的核心區(qū)域。

　　主要作用

　　確定細(xì)胞濃度：最核心的用途。算出每毫升懸液中有多少細(xì)胞，這是后續(xù)細(xì)胞接種、培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。

　　評(píng)估細(xì)胞活力：配合臺(tái)盼藍(lán)等染料使用，死細(xì)胞會(huì)被染上顏色，活細(xì)胞則拒染。計(jì)數(shù)時(shí)分別統(tǒng)計(jì)，就能算出細(xì)胞存活率。

　　監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長：在不同時(shí)間點(diǎn)計(jì)數(shù)，可以繪制細(xì)胞生長曲線，了解細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)。

　　確保實(shí)驗(yàn)一致性：在進(jìn)行藥物測(cè)試、病毒感染等需要對(duì)比的實(shí)驗(yàn)前，用計(jì)數(shù)板調(diào)整起始細(xì)胞數(shù)量一致，能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。

　　如何使用與計(jì)算?

　　準(zhǔn)備：清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，將特制的厚蓋玻片蓋在網(wǎng)格區(qū)域上。

　　加樣：吸10微升左右混勻的細(xì)胞懸液，從蓋玻片邊緣的“V”形缺口注入，利用毛細(xì)作用充滿計(jì)數(shù)室。

　　計(jì)數(shù)：在顯微鏡下，按特定規(guī)則(如數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右)統(tǒng)計(jì)四角和中央共5個(gè)大方格(每個(gè)包含16個(gè)小格)內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。

　　計(jì)算：根據(jù)公式算出原始懸液的細(xì)胞濃度。

　　細(xì)胞濃度 (個(gè)/毫升) = (5個(gè)方格的總細(xì)胞數(shù) / 5) × 10? × 稀釋倍數(shù)

　　公式中的 10? 源于計(jì)數(shù)室的高度是0.1毫米，因此一個(gè)大方格的體積正好是 0.1 µl。

　　使用注意

　　用完即清：樣本會(huì)干掉，必須立刻用蒸餾水沖洗干凈，然后晾干。嚴(yán)禁用刷子或強(qiáng)酸強(qiáng)堿清洗，以免損壞網(wǎng)格。

　　避免氣泡：加樣時(shí)不能有氣泡，否則會(huì)嚴(yán)重影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

　　細(xì)胞需分散：上樣前要確保細(xì)胞懸液是單個(gè)分散的，如果有成團(tuán)細(xì)胞，計(jì)數(shù)結(jié)果會(huì)偏低。

　　細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用后的處理非常關(guān)鍵，直接關(guān)系到儀器的壽命和下次計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。核心原則是：及時(shí)、溫和、清潔，嚴(yán)禁刮擦網(wǎng)格。

　　以下是標(biāo)準(zhǔn)處理流程：

　　1. 立即清潔(樣本未干時(shí))

　　樣本一旦變干，蛋白質(zhì)和鹽分會(huì)結(jié)晶，死死粘在網(wǎng)格上，極難清除，甚至可能損壞刻線。

　　吸去樣本：用吸水紙輕輕接觸蓋玻片邊緣，吸走多余的細(xì)胞懸液。

　　分離蓋玻片：小心地將特制的厚蓋玻片與計(jì)數(shù)板分離。

　　沖洗：用蒸餾水或去離子水(不要用自來水，其中的礦物質(zhì)會(huì)留下水漬)分別沖洗計(jì)數(shù)板的兩個(gè)計(jì)數(shù)平臺(tái)和蓋玻片。可以使用洗瓶沖洗，水流不要太猛。

　　2. 輕柔擦拭(如有必要)

　　沖洗后，如果還有殘留物(如細(xì)胞碎片或少量蛋白)，可以進(jìn)行擦拭。

　　正確工具：使用擦鏡紙或非常柔軟的棉布。

　　正確手法：將擦鏡紙用水打濕，朝同一個(gè)方向(例如從左到右)輕輕擦拭網(wǎng)格區(qū)域，不要來回擦。用干的部分吸去水分。

　　嚴(yán)禁使用：任何刷子(包括軟毛刷)、紙巾(木漿纖維會(huì)劃傷玻璃)、手指、酒精或有機(jī)溶劑(可能會(huì)溶解網(wǎng)格線中的材質(zhì)或留下薄膜)。

　　3. 干燥

　　清潔后，需要確保計(jì)數(shù)板和蓋玻片干燥，防止水漬殘留和霉菌滋生。

　　自然晾干：將計(jì)數(shù)板和蓋玻片放在干凈的吸水紙(如擦鏡紙)上，在無塵處自然晾干。

　　加速干燥：可用洗耳球或壓縮空氣(確保無油)輕輕吹干。

　　注意：不要用烘箱高溫烘干，可能導(dǎo)致玻片變形。

　　4. 檢查與保存

　　干燥后，在光線下檢查計(jì)數(shù)區(qū)域。如果看到網(wǎng)格線清晰、無斑點(diǎn)、無水漬，說明清潔合格。

　　保存：將清潔干燥的計(jì)數(shù)板放回專用的盒子或培養(yǎng)皿中，蓋上蓋子防塵。蓋玻片單獨(dú)保存。

　　下次使用前：下次使用前，只需用擦鏡紙輕輕擦拭一下除塵即可，無需再次水洗。